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离心机是蛋白表达通关装备之一

发布时间:2020-12-17 14:38:21??????点击:

  想要通关蛋白表达少不了离心机。常言道细节决定成败,尤其像蛋白表达提纯这样复杂的实验。一个操作上的小失误,可能直接影响最终结果。

  虽然可以大致分为三步,表达、分离、纯化,但是这个过程十分繁琐。

  蛋白表达前期还有一系列复杂过程,耗费时间也长,到最后一步,还不能放松警惕。

  蛋白进行纯化是通关的最后一步,选择合适的纯化方法,可以提高蛋白的纯化效率,让蛋白纯化简单便捷。常用的方法有:亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水层析等。

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  亲和层析

  亲和层析纯化是利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性进行蛋白纯化的技术。

  离子交换层析

  离子交换层析是一种依据蛋白表面所带电荷量不同进行蛋白分离纯化的技术。

  凝胶过滤层析

  凝胶过滤(也叫排阻层析或分子筛)是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。

  疏水作用层析

  疏水作用层析是利用盐-水体系中样品分子的疏水基团和层析介质的疏水配基之间疏水力的不同而进行分离的一种层析方法。

  虽然方法多种多样,但是,都需要用离心机来进行分离纯化。

  用脂肪氧合酶重组蛋白的诱导为例:

  1.接种含有重组脂肪氧合酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5 mL LB液体培养基中(含100 ug/mL 氨苄青霉素),37℃震荡培养过夜。

  2.按1∶50或1:100的比例稀释过夜菌,一般转接1 mL过夜培养物于100 mL(含100 ug/mL 氨苄青霉素)LB液体培养基中,37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8(最好0.6,大约需3 h)。取10 ul 样品用于SDS-PAGE 分析。

  3.对照组不加诱导剂,实验组加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l,37℃继续培养1-3h。

  4.离心机12000 rpm 离心10 min,弃上清,菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。

  以上就是关于蛋白表达的通关讲解,本文重点就是要表达,一个实验的成败,细节很关键,虽然人工方面是可以人为把控的,但是辅助设备的细节,还是要多加注意,选一台合适的离心机很关键。


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